水產(chǎn)品獸藥殘留快速分析

1 水產(chǎn)品藥殘概論

藥物在預(yù)防、治療水產(chǎn)疾病中起到積極作用，但同時又帶來了藥物殘留(簡稱藥殘)問題。目前，水產(chǎn)品藥物殘留問題日益嚴(yán)重，它不僅對人體健康造成潛在危害，而且還影響著水產(chǎn)品進(jìn)出口貿(mào)易，已成為出口貿(mào)易的瓶頸，因此加強(qiáng)水產(chǎn)品藥物殘留監(jiān)管，提高水產(chǎn)品質(zhì)量安全已是刻不容緩。

1．         水產(chǎn)品藥物殘留的定義

水產(chǎn)品藥物殘留是指對人體健康產(chǎn)生重大影響的，在水產(chǎn)品的任何食用部分中，藥物的原型化合物或者其代謝產(chǎn)物，及與藥物本體有關(guān)雜質(zhì)的殘留。主要的殘留藥物有消毒劑、驅(qū)殺蟲劑、抗菌藥(抗生素、磺胺類、呋喃類)、激素類、基因誘導(dǎo)劑、疫苗等。

2．  水產(chǎn)品藥物殘留對人體的危害

對于大多數(shù)人們來說，主要是通過食用帶有殘留獸藥的水產(chǎn)食品，這種接觸幾乎每天都有，是長期的。水產(chǎn)品藥物殘留對人體的危害主要有以下幾個方面：

（1）       人類細(xì)菌耐藥性增加

   目前漁用抗菌藥物使用范圍和劑量的日益擴(kuò)大，抗菌藥藥性殘留于水產(chǎn)動物食品中，同樣使人長期與藥物接觸，導(dǎo)致人體現(xiàn)人耐藥菌的增加，耐藥性的增強(qiáng)。現(xiàn)已研究證實(shí)細(xì)菌的耐藥性可以通過耐藥質(zhì)粒在人群中細(xì)菌、動物群中細(xì)菌和生態(tài)系統(tǒng)中細(xì)菌間相互傳遞，導(dǎo)致致病菌產(chǎn)生耐藥性。

  （2）毒性損傷

藥物殘留可通過食物鏈長期富集而對人體造成一定程度的損傷。如：硝酸亞汞、甘汞等制品對魚類小瓜蟲的治療效果好，但其在魚體內(nèi)易富集、殘留，當(dāng)人攝入后可引起腎損傷，表現(xiàn)為變性和壞死，引起腎功能降低。一些抗生素的長期使用和濫用在水產(chǎn)動物產(chǎn)品的殘留也會造成一些潛在的危害。如：氯霉素可抑制骨髓造血功能，引起再生障礙性貧血和粒細(xì)胞缺乏癥；呋喃唑酮可引起溶血性貧血、多發(fā)性神經(jīng)炎和急性肝壞死等；四環(huán)素類可抑制幼兒牙發(fā)育和骨骼生長；鏈霉素等氨基糖甙類抗生素?fù)p傷聽神經(jīng)和腎功能。

（3）過敏反應(yīng)或變態(tài)反應(yīng)

   磺胺類、四環(huán)素類、喹諾酮類和某些基糖甙類抗生素等藥物殘留于水產(chǎn)動物性產(chǎn)品中進(jìn)入人體后，就使得敏感個體致敏，產(chǎn)生抗體。當(dāng)這些被致敏的個體再次接觸這些抗生素時，則這些抗生素會與抗體結(jié)合生成抗原抗體復(fù)合物，激活體內(nèi)肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞，釋放組胺、ECF-A、LTS、PG和PAF等物質(zhì)刺激，集體出現(xiàn)平滑肌痙攣、身管擴(kuò)張、微血管通透性增加、組織水腫、粘膜腺體分泌等病理損傷。過敏反應(yīng)或變在臨床上輕者可表現(xiàn)為有瘙癢的蕁麻疹、惡心嘔吐、腹痛腹瀉，重者表現(xiàn)為血壓急劇下降、迅速引起過敏性休克，甚至死亡。如磺胺類藥物可引起人類的皮炎、血細(xì)胞減少、溶血性貧血和藥熱等臨床癥狀。

（4）三致作用

即致癌、致畸、致突變作用。藥物及環(huán)境中的化學(xué)藥品可引起基因突變或染色體畸變而造成對人類的潛在危害。如水產(chǎn)常用促生長劑喹乙醇，現(xiàn)已證實(shí)有明顯的蓄積毒性、遺傳毒性和誘變性。長時間使用會在魚體內(nèi)殘留，而對人的健康造成潛在的威脅，因此對于喹乙醇用于水產(chǎn)的安全性需進(jìn)一步評價。水產(chǎn)上常用的治療水霉病的藥物孔雀石綠，是一種強(qiáng)致癌物。據(jù)報道魚體短期一次接觸孔雀石綠1/15000濃度，就可致細(xì)胞突變，現(xiàn)在許多國家和組織已禁止使用。硝基呋喃類藥物（如呋喃唑酮、呋喃西林）近來的研究認(rèn)為長期使用除了會對肝、腎造成損傷外，同時具有致癌作用和致畸、致突變效應(yīng)。做為水產(chǎn)上常用的消毒藥二氯異氰尿酸鈉和三氯異氰尿酸過去認(rèn)為是安全、高效的消毒藥，但近來研究證實(shí)其在水體中的分解產(chǎn)物氰尿酸降解速度非常緩慢，且對人體有致癌作用。此外在水產(chǎn)上常用的殺蟲藥敵百蟲、促生長劑乙烯雌酚、砷制劑等都已證明具有致癌作用。許多國家都已禁止這些藥用于水產(chǎn)養(yǎng)殖。當(dāng)人們長期食用含有三致作用藥物殘留的動物性食品時，這些殘留物便會對人體產(chǎn)生危害，或在人體內(nèi)蓄積，最終產(chǎn)生致癌、致畸、致突變作用。近年來人群中腫瘤發(fā)生率不斷升高，人們懷疑與環(huán)境污染及動物性食品中藥物殘留有一定關(guān)系。

  3．  水產(chǎn)品藥物殘留控制的意義

由于水產(chǎn)養(yǎng)殖藥物殘留具有三致作用、毒性損傷、激素樣作用等危害，嚴(yán)重威脅人體健康，已成為人類的隱形殺手。近幾年我國出口的水產(chǎn)品因藥物殘留問題屢遭禁運(yùn)，首先是2001年9月，歐盟因氯霉素殘留問題將我國出口到歐盟的凍蝦產(chǎn)品納入快速預(yù)警機(jī)制； 2002年3月，日本厚生省對我國出口到日本的動物源性產(chǎn)品實(shí)行嚴(yán)檢，并向我方通報從福建進(jìn)口的鰻魚產(chǎn)品中檢出大量氯霉素殘留，同時公布了11種藥物的最大殘留限量。2006年上海市質(zhì)量監(jiān)督局從山東產(chǎn)的大鯪鲆中檢測出硝基呋喃類代謝物超標(biāo)，全國一片嘩然。由此可見，我國從保障人民群眾健康，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)要持續(xù)健康發(fā)展，水產(chǎn)品要進(jìn)入國際市場的需要，必須嚴(yán)格控制藥物殘留。 

4．  水產(chǎn)養(yǎng)殖中藥物殘留的控制措施

⑴根據(jù)藥物在水產(chǎn)動物體內(nèi)的藥代動力學(xué)規(guī)律合理用藥。

⑵開展多種形式的教育工作，提高全民關(guān)于水產(chǎn)動物食品安全性的整體認(rèn)識，引導(dǎo)水產(chǎn)養(yǎng)殖者科學(xué)用藥，推廣健康養(yǎng)殖技術(shù)。

⑶加強(qiáng)和完善我國漁藥殘留的監(jiān)控體系。

a.建立和完善水產(chǎn)品的安全保障體系，依法開展水產(chǎn)品無公害臨界控制的檢驗(yàn)檢疫工作。

b.加強(qiáng)藥物殘留的方法和標(biāo)準(zhǔn)建設(shè)，在標(biāo)準(zhǔn)制定中要突出水產(chǎn)品安全衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、漁藥使用規(guī)范、藥物殘留限量及相應(yīng)的檢測技術(shù)和檢測方法的制定。

c.加快縣市一級藥物殘留檢測機(jī)構(gòu)的建立和建設(shè)，使之形成從完善的藥物殘留檢測網(wǎng)絡(luò)機(jī)構(gòu)，便于開展水產(chǎn)品中藥物殘留的常規(guī)檢測，加強(qiáng)藥物殘留的監(jiān)控力度。

2 水產(chǎn)品藥殘分析原理

1．水產(chǎn)品藥殘快速檢測的構(gòu)成要素

相應(yīng)的檢測儀器（酶標(biāo)儀或?qū)�業(yè)分析儀TR-300）、樣品前處理工具和檢測試劑盒。

2．檢測原理

采用免疫競爭法定量。微量反應(yīng)板上包被有羊抗兔抗體，檢測時加入特異性的待檢藥殘抗體、待檢藥殘標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品溶液及辣根過氧化物酶標(biāo)記的藥殘結(jié)合物溶液，室溫（25℃）下反應(yīng)，待測藥殘標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液及過氧化物酶偶聯(lián)待測藥殘結(jié)合物競爭性地與待測藥殘抗體結(jié)合，形成抗原抗體復(fù)合物。洗滌后加酶反應(yīng)底物和顯色劑，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無色的顯色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物。加入反應(yīng)終止液后使顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，在450nm處測量吸光度值，樣品中的待測藥殘濃度與吸光度值成反比。

 

3 我國的分析標(biāo)準(zhǔn)

我國現(xiàn)行獸藥殘留分析的標(biāo)準(zhǔn)分兩類，一類是國家標(biāo)準(zhǔn)，一類為農(nóng)業(yè)部的檢測方法，快速分析大多為農(nóng)業(yè)部的檢測方法。

4 應(yīng)用及測試步驟

1．應(yīng)用

水產(chǎn)品藥殘快速分析主要有兩個方面的應(yīng)用，第一是為了適應(yīng)大量水產(chǎn)品的常規(guī)檢測，對于各級水產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測機(jī)構(gòu)需要快速檢測法，即使用快速檢測法對大量樣本進(jìn)行初步篩選，再對初篩中具有超出農(nóng)業(yè)部限量的結(jié)果的樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，如應(yīng)用HPLC、GC、MS、HPLC-MS等進(jìn)行進(jìn)一步測定。第二是為了適應(yīng)隨時隨地的快速檢測，對于縣市一級的水產(chǎn)品檢測機(jī)構(gòu)，漁業(yè)合作社、水產(chǎn)公司、水產(chǎn)批發(fā)市的質(zhì)量監(jiān)管部門需要快速檢測法，即在短時間內(nèi)對樣本作出判斷，將具有超出農(nóng)業(yè)部限量結(jié)果的產(chǎn)品阻止在流通環(huán)節(jié)之外。

典型用戶類型

1 海洋與漁業(yè)廳/市縣局的水產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心、水產(chǎn)種苗監(jiān)督管理站

2  衛(wèi)生廳/衛(wèi)生監(jiān)督所

3  人民政府食品辦公室

4  內(nèi)地水利水產(chǎn)局/水產(chǎn)股/漁政

5  產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)所

6  出入境檢驗(yàn)檢疫部門

7  食品質(zhì)量監(jiān)督檢測機(jī)構(gòu)

8  工商局流動檢測車

9  水產(chǎn)批發(fā)市場

10 農(nóng)貿(mào)市場

11 大型廠礦

12 企事業(yè)單位

13 飯店，賓館，超市

……

2． 我公司關(guān)于水產(chǎn)品藥殘快速測試步驟

 （1）樣品前處理（以氯酶素藥殘為例）

 

水產(chǎn)品（肉類）藥殘富集、提取器操作

------前處理氯酶素藥殘

 

一、  器具準(zhǔn)備

1．  水產(chǎn)品（肉類）藥殘富集、提取器；

2．  離心機(jī)：4000rpm，6孔20ml角轉(zhuǎn)子；

3．  20-200 ,100-1000μl數(shù)字可調(diào)移液槍各一支；

4．  手掌天平：100/0.01 g；

5．  組織均質(zhì)器：2000-11000轉(zhuǎn)/分；

6．  組織攪拌器：500轉(zhuǎn)/分；

7．  10 ml具蓋塑料離心管若干、20ml塑料離心管12個，50 ml若干塑料離心管4個；

8．  手術(shù)剪刀一個

9．  試劑：

   乙酸乙酯（分析純），100ml貯瓶；正已烷（分析純），100 ml貯瓶；已稀釋的組織樣品萃取劑，50 ml貯瓶。

二、組織樣品制備                                     

     稱取100g去除皮、筋膜的魚脊背肉組織，用手術(shù)剪刀按2х2cm剪成塊，放入組織均質(zhì)器中，每5秒一次，直至打成肉泥。

三、組織樣品藥殘?zhí)崛　⒏患?span>

1．稱取1g均質(zhì)好的組織樣品于10 ml具蓋塑料離心管中，離心管置于提取架上，用移液槍吸取6000μl乙酸乙酯于離心管內(nèi)，離心管上蓋。

2．在藥殘富集、提取儀上，設(shè)定倒置計時時間為5分鐘，倒入38℃左右熱水于水浴器內(nèi)1/2，超聲發(fā)生系統(tǒng)開啟，放入離心管，倒置計時時間為0時取出離心管。

3．離心管放入離心機(jī)中，2500 rpm離心8分鐘。

4．用移液槍吸取4000μl上清液于另一離心管中，置于藥殘富集、提取儀吹淋系統(tǒng)架上，吹淋管放入離心管中（注意不能接觸離心管內(nèi)液面），打開氣源發(fā)生器減壓開關(guān)，調(diào)節(jié)吹淋系統(tǒng)壓力為0.0015kg，50℃恒溫吹干，過程約3分鐘。

5．移液槍吸取1000μl正已烷（分析純），溶解吹干后的離心管剩余物，超聲2分鐘，再吸取500μl已稀釋的組織樣品萃取劑加入離心管內(nèi)，繼續(xù)超聲1分鐘。

6．超聲完畢的離心管放入離心機(jī)中，離心管上蓋，2500 rpm離心8分鐘，下層液相用于檢測。

樣品前處理完畢。

  （2）樣品檢測

      藥殘快速分析儀操作------氯酶素藥殘

                       

一、檢測儀器操作

開啟藥殘快速分析儀，進(jìn)入“藥殘快速分析”界面。

第一步 編程

 點(diǎn)擊“編程”，  進(jìn)入編程界面，進(jìn)行項目設(shè)定，點(diǎn)擊“下級”進(jìn)入編程

1．  項目名稱和檢測編號設(shè)定，

2．  下一級“波長”單、雙波長選擇，

3．  下一級“樣品”單、雙樣和標(biāo)準(zhǔn)雙樣設(shè)定，

4．  下一級“檢測方式”設(shè)定（吸光度值，定量檢測），

5．  下一級“報告方式”設(shè)定（濃度值、正常值、稀釋倍數(shù)），

6．  下一級“孔位設(shè)置”（空白、質(zhì)控、標(biāo)準(zhǔn)孔）。 

7．  下一級 “參數(shù)輸入”（梯度標(biāo)準(zhǔn)值、單位、正常值/限量判定）

8．  編程結(jié)束，貯存。            

第二步 點(diǎn)擊“檢測”進(jìn)入檢測界面

找到要檢測的項目和編號，進(jìn)入該項目

進(jìn)行檢測。

板孔設(shè)定如下（檢測雙樣）

     

            S=標(biāo)準(zhǔn)樣品      T=測試樣品

S1	S1-1	T1	T1-1	T9	T9-9	T17	T17-17	T25	T25-25	T33	T33-33
S2	S2-2	T2	T2-2	T10	T10-10	T18	T18-18	T26	T26-26	T34	T34-34
S3	S3-3	T3	T3-3	T11	T11-11	T19	T19-19	T27	T27-27	T35	T35-35
S4	S4-4	T4	T4-4	T12	T12-12	T20	T20-20	T28	T28-28	T36	T36-36
S5	S5-5	T5	T5-5	T13	T13-13	T21	T21-21	T29	T29-29	T37	T37-37
S6	S6-6	T6	T6-6	T14	T14-14	T22	T22-22	T30	T30-30	T38	T38-38
		T7	T7-7	T15	T15-15	T23	T23-23	T31	T31-31	T39	T39-39
		T8	T8-8	T16	T16-16	T24	T24-24	T32	T32-32	T40	T40-40

 

標(biāo)板設(shè)定按圖4，根據(jù)檢測量，可全選或部分選，標(biāo)板設(shè)定完畢后，待檢測操作完成后，點(diǎn)擊“開始”進(jìn)行檢測。

二、加樣記錄準(zhǔn)備                

待所有試劑的溫度回復(fù)至室溫（約19℃至25℃）方可使用。為了減低邊緣效應(yīng)，建議在反應(yīng)過程中用標(biāo)板密封膠片將標(biāo)板密封。每個標(biāo)準(zhǔn)或樣品要做兩份平行試驗(yàn)，并做好加樣位置的記錄。

三、檢測操作

1．用移液槍吸取標(biāo)準(zhǔn)或樣品25ul，分別加入到指定的微孔中，然后加入100ul酶標(biāo)記物到每一個微孔中，用密封膠紙把反應(yīng)板蓋住。

2．左右輕敲反應(yīng)板邊緣數(shù)秒，將其置于室溫下（19℃～25℃）培養(yǎng)1小時。翻轉(zhuǎn)反應(yīng)板，使孔內(nèi)所有液體傾出。

3．吸取已稀釋的洗滌緩沖劑250—300ul洗滌反應(yīng)板4次，每次洗滌時，將所有液體輕輕倒出、拍干。

4．立刻用移液槍移取125μl單組分底物/發(fā)色劑到每一孔里。完畢后，左右輕敲反應(yīng)板，將其放在避光處（約20℃至25℃）20±2分鐘。

5．加入100μl0.2M硫酸終止反應(yīng)，反應(yīng)物的顏色會由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。

6．在10分鐘內(nèi)，上藥殘分析儀，測定，打印結(jié)果。

5 國內(nèi)水產(chǎn)品藥殘快速檢測市場分析

   1．檢測形式分析

   目前國內(nèi)水產(chǎn)品藥殘分兩種檢測形式，第一種為“兩步法”，即酶標(biāo)儀法，利用醫(yī)療檢測設(shè)備酶標(biāo)儀對水產(chǎn)品藥殘進(jìn)行（OD值）的比色，測出OD值后，或利用電子計算器進(jìn)行半對數(shù)計算，或利用試劑廠家提供的計算小軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，再求反對數(shù)結(jié)果；第二種為“一步法”，即專用藥殘分析儀法，利用專用藥殘分析儀，檢測結(jié)果直接求出，并配有標(biāo)準(zhǔn)曲線圖形，相關(guān)系數(shù)，回歸線性方程的斜率和截距，檢測一目了然。（對于政府部門對于水產(chǎn)品藥殘的市場管理，可設(shè)定出農(nóng)業(yè)部的限量標(biāo)準(zhǔn)，檢測結(jié)果直接顯示和判定是否超標(biāo)）

   雖然有的酶標(biāo)儀廠家也給出了定量計算公式，但由于檢測試劑不同，稀釋倍數(shù)不同，也沒辦法直接得出結(jié)果。

2．前處理工具分析

以往水產(chǎn)品藥殘快速檢測項目，政府或用戶招標(biāo)采購后，酶標(biāo)儀只做為終端機(jī)使用，最多配幾只移液器，往往忽略前處理工具的采購，二次采購需要增加德國進(jìn)口均漿機(jī)，氮吹儀，震蕩器，培養(yǎng)箱等設(shè)備，增加很大成本，且儀器設(shè)備多而笨重，實(shí)現(xiàn)不了便攜現(xiàn)場檢測。

    GZTRAD水產(chǎn)品藥殘快速檢測儀的前處理采用超聲萃取技術(shù)，所用設(shè)備為模塊化的藥殘快速富集提取器，前處理設(shè)備和檢測儀器集中在兩個工具箱內(nèi)，可實(shí)現(xiàn)便攜現(xiàn)場檢測。

6 GZTRAD水產(chǎn)品（肉類）藥殘快速檢測儀特點(diǎn)

1. 見宣傳材料。

2. 定標(biāo)曲線帶曲線修正功能，很大程度上避免了檢測試劑對檢測結(jié)果的影響。

3. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的存貯，節(jié)省昂貴的檢測試劑。同一檢測試劑，最少可進(jìn)行一個樣品的檢測，最多可進(jìn)行84個樣品檢測，而不用再做定標(biāo)曲線。

7        藥殘快速分析儀儀器維護(hù)及質(zhì)量保證

1．儀器維護(hù)

1．1概述

本儀器在正常使用過程中,只需正常的清潔維護(hù)即可，但以下部件經(jīng)長時間工作后，可能會出現(xiàn)失效或故障，請到指定維修點(diǎn)維修或請用戶在專業(yè)人員指導(dǎo)下進(jìn)行維修。為了使儀器保持一個良好的狀態(tài)，必須做好日常維護(hù)工作。

警告：儀器的維修需要專業(yè)人員操作，在維修或其他原因拆卸外殼時必須切斷電源，并且閉主機(jī)。

1.2 清潔儀器

    1）保持儀器工作環(huán)境的清潔。

2）儀器表面的清潔，可以用中性清潔和濕布擦試。

3）液晶顯示器請用柔軟的布清潔。

警告：請勿讓任何溶劑、油脂類、腐蝕性物質(zhì)接觸儀器。

1.3 儀器部件更換

1.3.1 更換保險絲

1）  關(guān)閉電源開關(guān)。

2）保險絲安裝在儀器后面電源開關(guān)旁邊的保險絲盒中，擰開保險盒十字螺釘，更換同種規(guī)格的保險絲。保險絲規(guī)格：φ5×20  250V、2A。

1.3.2 更換濾光片

濾光片經(jīng)過一段使用后，基透射率會有所下降。當(dāng)下降到儀器不能正常工作時，儀器會自動給出顯示，提醒用戶及時更換。更換方法如下：打開儀器上蓋，找到濾光盤，查到失效的濾光片，取出已失效的舊片，換上新片即可。

1.3.3 更換光源燈

當(dāng)光源燈損壞時，儀器也會自動給出顯示，這時可打開儀器上蓋，經(jīng)檢查確定是燈泡損壞時，拔下燈插座，用手輕輕由下向上取出燈泡，更換上新的同規(guī)格燈即可。如果更換新燈泡后，儀器仍指示有故障，請及時通知本公司專業(yè)人員前去調(diào)試。

1.4 簡單故障處理

現(xiàn)    象	原     因	解  決  方  案
儀器不能啟動	電源不正常	檢查是否通電，電源插頭不否松脫，保險絲是否斷路，電源電壓是否合格。
托盤運(yùn)動不正常	步進(jìn)電機(jī)引線插接不良；同步帶松脫；運(yùn)動部件移位卡住支，定位光耦松脫或損壞	校正傳動機(jī)構(gòu)，請專業(yè)人員調(diào)整。重新檢查各聯(lián)接線，擰緊松動光耦。
自檢不正常	光系統(tǒng)故障；波長設(shè)置不對	查看光源燈是否亮，重新設(shè)置一次系統(tǒng)的波長值。
檢測結(jié)果不正確	光源燈和濾光片老化	及時更換新的光源燈和濾光片
打印機(jī)燈常閃	打印機(jī)接收故障，傳送數(shù)據(jù)出錯	關(guān)掉打印機(jī)電源，等一會再打開；更換打印控制板

 

2． 質(zhì)量承諾

    從發(fā)貨之日起一年內(nèi)，本儀器若因質(zhì)量問題不能正常工作，本公司將無償為用戶修理或更換元器件或更換該產(chǎn)品。對于違反規(guī)定或者用戶自拆卸導(dǎo)致儀器損壞，則須收取維修工本費(fèi)，一年以后，本公司負(fù)責(zé)該儀器的終身維護(hù)。