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攪拌式動物細胞培養罐簡介

[2011/2/16]

  攪拌式動物細胞培養罐是多功能培養罐,設置有四氣混合系統, 可以通過配置對應的Spinfilter、無氣泡硅膠管通氣系統、低剪切力攪拌槳等配套配件后,用于動物細胞的分批、流加連續培養。 通過變換攪拌槳和通氣方式也可作為微生物培養罐.可實現pH值、pO2、溫度、二氧化碳、營養物自動流加、攪拌速率等自動化控制,可以通過計算機的遠程控制軟件對培養過程進行嚴格的控制。 除了用于動物細胞和微生物的培養外,該系統的能實現生物化學反應條件(例如pH值、溫度、流加)的精密范圍內控制, BC2生物反應器系統也可以應用于蛋白藥物PEG修飾反應過程的反應條件控制。

  攪拌式動物細胞培養罐是最經典、最早被采用的一種細胞培養罐。在諸多細胞培養罐類型中,該種培養罐最能體現動物細胞培養罐的設計理念,它通常由罐體、管路、閥門、泵及馬達組成,由馬達帶動槳葉混合培養液,通過攪拌器的作用使細胞和養分在培養液中均勻分布;罐體上安裝的不同傳感器,用以在線持續檢測培養液的pH、溫度、溶氧等重要參數;小罐體通常采用硼硅酸鹽玻璃制作,用于實驗室規模使用;大罐體采用不銹鋼材質,用于大規模生產。目前,FDA批準的主流生產工藝是攪拌式動物細胞培養罐流加培養工藝,也是當前動物細胞大規模培養的主流。原因在于:攪拌式動物細胞培養罐既可用于懸浮細胞培養,也適用于微載體貼壁細胞培養,培養工藝容易放大,可以為細胞的生長和增殖提供均質的環境;產品質量穩定,非常適合于工廠化生產生物制品。雖然攪拌所產生的剪切力對細胞有害,但是通過改變槳葉的形狀和尺寸,或者是在培養基中添加一些血清、牛血清白蛋白、葡聚糖及非離子表面活性劑Pluronic F68 等,可降低剪切力造成的影響。攪拌式動物細胞培養罐的細胞密度可達2×107 個/ml,并且生產放大工藝相對簡單,懸浮細胞培養較易放大到萬升規模以上。Lonza公司擁有8臺20000L的攪拌式動物細胞培養罐,采用全懸浮培養技術生產抗體;Baxter公司在2008 年報道,利用8 周時間使Vero細胞微載體培養規模從1ml放大到6000L的規模;美國Genentech 公司使用12000L攪拌式動物細胞培養罐培養CHO細胞,生產t-PA重組蛋白以及治療癌癥的生物藥物。工業應用細胞培養罐罐體通常由不銹鋼制造,按照耐壓容器要求進行設計。罐體頂端或底部安裝馬達,驅動槳葉進行攪拌,帶動液體介質(培養液)的流動,實現混合和傳質效果;罐體頂端或側面安裝的在線傳感器(pH、溫度、溶氧等),與控制器相聯,可以連續測定罐體培養液的培養參數;細胞培養罐自動化程度越高,相應配備的傳感器數量也越多;在整個培養過程中,依靠各種不同的傳感器,細胞培養罐能夠在線(on line)連續監測和調整與細胞生長、分化、增殖、凋亡有關的參數,使它們始終保持最佳組合;側面安裝有取樣閥,便于取樣;頂部具有燈鏡和視鏡,用于培養罐內部觀察;罐體底部安裝罐底隔膜閥,用于料液排放。罐體的設計還應利于在線清潔和滅菌,避免死角的出現。

  細胞培養罐的支架管路,是培養罐提供氣(汽)體、液體的通道,通過各種閥門進行管路的開啟和關閉控制。通過電加熱、增壓泵、蠕動泵、氣體過濾器、氣體流量計、氣體比例調節閥等裝置的檢測、運轉,維持反應器運行過程中的參數穩定。培養罐的控制器,用以采集培養罐運行時的各種狀態參數,并進行自動或手動控制。

  攪拌式動物細胞培養罐的基本功能

  動物細胞培養的條件要求復雜,為獲得更好的細胞培養效果,往往配備各種配件或儀器,以實現培養罐功能。細胞培養罐通常具備以下基本功能:

  1) 攪拌控制功能。通過馬達帶動攪拌槳葉攪拌,實現液體的均勻混合,帶動細胞或載體的懸浮,并具有較低的剪切力,降低對細胞的損傷。細胞培養罐攪拌系統可分為磁力攪拌和機械密封攪拌兩種形式。前者采用先進的磁力攪拌器裝置,使培養罐系統完全與外界隔絕,具有優良的系統密封性,保證了反應器長時間無菌運行安全性;后者采用改良的機械密封技術和獨特的操作方法,避免了傳統的機械密封泄露、不利于長時間無菌運轉的弊端。

  2) 溫度控制功能。動物細胞培養罐采用夾套循環水進行溫度控制,利用蒸汽或電加熱器進行加熱,注入冷卻水進行降溫。使用蒸汽加熱能迅速提高培養罐溫度,使用電加熱器提高了培養罐溫度控制的靈敏性和穩定性。

  3) pH控制功能。使用pH電極進行檢測,由控制程序PID自動控制酸堿液的加入,實現pH控制。

  4) 溶氧控制功能。使用溶氧電極進行檢測,由控制程序PID自動控制氣體的加入,實現溶氧的控制。

  5) 液位控制功能。使用培養罐進行灌流培養時,為保持培養體積的恒定,可使用液位電極或稱重模塊來實現控制。

  6) 細胞截留功能。使用培養罐進行灌流培養時,使用旋轉過濾器將細胞截留在反應器之內,可提高細胞培養密度。

  7) 蒸汽滅菌功能。動物細胞培養罐具備手動滅菌和自動滅菌兩種方式,能夠穩定實現在線蒸汽滅菌功能。

  8) PID 軟件控制功能。動物細胞培養罐采用觸摸屏控制和計算機終端遠程控制兩種模式,具有數據顯示、工藝狀態顯示, 工藝參數控制、校正,數據記錄存儲、歷史數據查詢等功能,符合GMP 管理對制品的記錄和可追溯性要求。 配備有計算機終端遠程控制功能,操作人員通過終端機即可實現對反應器的操作和監控。

  動物細胞培養用攪拌式動物細胞培養罐還具備以下特點:

  管路布局合理、簡潔,有效消除管路滅菌死角,并實現了管路在線滅菌功能。滅菌操作簡單方便,滅菌效果可靠,為反應器無菌控制提供了有效保障。

  深層通氣系統采用微泡發生器,使氣泡更小、更均勻,溶氧傳遞效果良好。

  支架管路系統通過優化設計,減少氣體使用的種類,使用方便。

  電極、儀表、控制器、閥門等重要設備和元器件,均選用品質優良的進口設備,充分保證了反應器使用可靠性和運行穩定性。