1.細胞：選對數生長期細胞，收集細胞24小時前換液一次。

　　2.計數：按常規方法把細胞制成細胞懸液，計數，令細胞密度達5×106/ml，離心去上清，吸入離心管中。

　　3.凍存液：先用培養液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液，按上法一滴滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸。

　　4.分裝：分裝入無菌安剖中，每安剖加1.5毫升細胞懸液。

　　5.封口：用塑料安剖時擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后，仔細檢查，定要封嚴，必要時可浸入藍色液中觀察，為安全起見，把安剖縫入紗布小袋中，以防液氮浸入后，融解時因受熱發生爆炸傷人;紗袋一端系以線繩，末端扎有小牌，注明：細胞名稱，凍存日期，以便日后查找。